УДК 619: 616-006.446-097.2/:636.2

   Лейкоз крупного рогатого скота является, главным образом, вирусным заболеванием, для которого характерно наличие высокого уровня противовирусных антител и интегрированного ДНК - провируса, находящегося в лимфоцитах в репрессированном состоянии. Лейкоз развивается не у всех инфицированных животных. Для развития болезни, кроме наличия вируса, необходимы также другие факторы, определяющие резистентность организма [1-3].
   В последнее время особое внимание уделяется выяснению взаимосвязи развития лейкозов с иммунной недостаточностью организма. Установлено иммунодепрессивное воздействие вируса лейкоза (ВЛ) крупного рогатого скота, выражающееся в резком подавлении функциональной активности лимфоцитов [4,5]. Нарастание количества лейкоцитов в крови имеет место только на фоне индуцированной таким вирусом иммунодепрессии, при которой наблюдается подавление иммунореактивности, предшествующее развитию синдрома лимфоцитоза [6].
   Положительное воздействие на организм больных лейкозом животных могут оказать пролин-богатые полипептиды (ПБП), представляющие собой новую семью иммуномодуляторов, продуцируемых магноцеллюлярными клетками NPV и NSO гипоталамуса животных [7-10].
   Опухоли органов иммунной системы классифицируются как лимфомы и лейкемии [11]. А.А. Галоян и В.А. Шахламов показали, что ПБП-1 оказывает прямое подавляющее влияние на пролиферацию опухолевых Т-клеток человека, на так называемые Jurkat клеток. ПБП-1 in vitro дозозависимым образом (1×10^-10-1×10^-6 М) ингибирует пролиферацию этих клеток. Выяснилось также, что ПБП-1 в условиях in vitro разрушает ультраструктуру опухолевых клеток фибробластов (L₉₂₉)[12], а также клеток нейриномы Гассерова узла у крыс [13]. В настоящем исследовании приводятся данные о прямом воздействии (in vitro) ПБП-1 на клетки крови.
   В опытах использовали пробы цельной крови 12 коров, принадлежащих жителям села Айанист Масисского района (пробы крови брались из яремной вены животного).
   При определении содержания гемоглобина, количества эритроцитов и лейкоцитов в 1 мкл крови, приготовлении и фиксации мазков крови, окраске их по Романовскому-Гимза использовались общепринятые методы ветеринарной гематологии. Подсчет лейкоцитарной формулы крови, дифференциация отдельных форм лейкоцитов проводились на окрашенных препаратах под иммерсионным объективом при увеличении в 630х, а структуры клеточных элементов - при увеличении в 900х. Для исследования сывороток крови с целью выявления инфицированных ВЛ животных методом реакции иммунодиффузии использовали коммерческий набор Курской биофабрики. ПБП-1 в виде водного раствора добавлялся в пробирки из расчета 0.01 мкг на 1 мл крови (0.1 мкг в 10 мкл инкубационной смеси, инкубационный период 24 ч при температуре 37,5^o).
   Результаты исследований показали, что из 12 проб крови 8 реагировали положительно по реакции иммунодиффузии. По данным гематологических и цитоморфологических исследований проб крови животные были разделены на три группы (по 4 головы в каждой): здоровые, в предлейкозном состоянии, в начальной стадии развития лейкозного процесса.
   Выяснилось, что под действием препарата in vitro в крови у здоровых коров существенных сдвигов в уровне изучаемых показателей не наблюдалось.
   У животных, находившихся в предлейкозном состоянии, количество лейкоцитов и абсолютное количество лимфоцитов в 1 мкл крови снизилось на 30 и 35%, соответственно (p < 0.01), а относительное содержание лимфоцитов в лейкоформуле - на 9%. Значительные изменения наблюдались в относительном содержании отдельных субпопуляций лимфоцитов. При этом отмечалось резкое повышение количества малых лимфоцитов (до 67%) (p < 0.001) на фоне понижения количества средних лимфоцитов (p < 0.001). Примечательно, что до применения препарата относительный уровень больших лимфоцитов в крови у этой группы коров составлял 11.5±0.6% (от общей суммы лимфоцитов), тогда как после воздействия ПБП-1 обнаружить клетки этой субпопуляции лимфоцитов не удалось.
   Выраженные изменения указанных показателей под воздействием ПБП-1 наблюдались в крови коров, находившихся в начальной стадии развития лейкозного процесса. Количество лейкоцитов и абсолютное количество лимфоцитов снизилось на 30 и 41%, соответственно (p < 0.001), а относительное содержание лимфоцитов в лейкоформуле - на 11% (p < 0.01). Существенные сдвиги наблюдались в относительном содержании отдельных субпопуляций лимфоцитов. Уровень малых лимфоцитов повысился более чем в два раза (p < 0.001) на фоне статистически достоверного (p < 0.001) снижения содержания средних лимфоцитов. Клеток субпопуляции больших лимфоцитов после применения ПБП-1 обнаружить не удалось, тогда как до применения ПБП-1 содержание больших лимфоцитов составляло 20.2±0.3% (от общей суммы лимфоцитов).
   Известно, что изменение количества лейкоцитов и содержания лимфоцитов, а также отдельных субпопуляций лимфоцитов обусловлено увеличением относительного содержания трансформированных В-лимфоцитов, циркулирующих в периферической крови, которые характеризуются патологически измененными метаболизмом и функционально-структурными особенностями. В основе изменений относительных содержаний этих показателей при развитии лейкоза лежат понижение более реактивных и резистенных малых лимфоцитов и повышение менее устойчивых средних и больших лимфоцитов.

   По нашим данным под воздействием ПБП-1 in vitro отмечается определенная тенденция к нормализации рассматриваемых показателей. При этом подавляющее воздействие ПБП-1 на пролиферацию злокачественно трансформированных клеток выражено снижением числа тех лимфоцитов, повышение которых способствует дальнейшему прогрессированию лейкозного процесса. Если предлейкозное состояние болезни характеризуется усиленной пролиферацией лимфоидных клеток, которая проявляется в крови только лимфоцитозом (повышением числа нормальных лимфоцитов), то в начальной стадии обнаруживаются также малодифференцированные и атипичные опухолевые клетки, как в периферической крови, так и в кроветворных органах. По данным наших исследований относительное содержание таких клеток составляло 1.7%.

   При цитоморфологических исследованиях мазков периферической крови животных до применения гипоталамического цитокина ПБП-1 в морфологической структуре нейтрофилов (палочко- и сегментоядерных), эозинофилов и моноцитов выраженных изменений не наблюдалось (рис.1). В мазках крови коров только в начальной стадии развития лейкоза были обнаружены единичные пролимфоциты, лимфобласты и атипичные опухолевые клетки (рис.2). Под воздействием препарата выраженные цитоморфологические изменения обнаружены в различных субпопуляциях лимфоцитов. В поле зрения в большом количестве выявлены остатки разрушенных, в основном больших и средних, лимфоцитов, при этом в структуре малых лимфоцитов изменений не наблюдалось. После применения ПБП-1 в мазках крови коров в начальной стадии болезни не обнаружены пролимфоциты, лимфобласты и атипичные опухолевые клетки. Нам удалось выявить не только клеточные остатки распада трансформированных лимфоцитов, но и сам процесс разрушения, при котором целостность клетки сохранена, но хроматин ядра полностью разрушен (рис.3).
   Под воздействием препарата в морфологической структуре нейтрофилов и эозинофилов существенных изменений не наблюдалось (ядра единичных эозинофилов были растянуты).