УДК 547.915+547.953+577.153+54-39

   Изучение метаболизма мембран лимфоцитов (МЛ) селезенки белых крыс при отравлении их микотоксином зеараленоном (МТЗ) представляет интерес для многих направлений медико-биологического профиля [1].
   Жирнокислотные компоненты липидов в качестве субстратов окисления, активно вовлекающихся в процессы свободнорадикального окисления (СРО), образуют продукты переокисления типа гидроперекисей, моно-, ди- , триеновых конъюгатов, соединений типа Шиффа, малонового диальдегида (МДА), формирующие в комплексе систему с мощным мембранотоксическим и мембранолитическим действием. Последнее обуславливает одно из главных молекулярно-биологических звеньев патогенетического механизма действия МТЗ [2].
   Целью настоящего исследования явилось изучение особенностей изменения в МЛ селезенки белых крыс в различные периоды интоксикации МТЗ, сдвигов интенсивности течения реакций СРО липидов. Исследования проводились по выявлению и изучению особенностей нарушения интенсивности течения процессов СРО липидов в деталях при интоксикации в ферментативой и неферментативной системах [3].
   Исследования проводились на 10 беспородных белых крысах-самцах массой 150-170 г, содержащихся на ординарном пищевом рационе в обычных условиях вивария. Интоксикацию МТЗ производили путем однократного внутривенного введения 1 мл этанолового раствора МТЗ в концентрации 15 мкг/мл в месте слияния верхней полой и подключичной вен (Angulus venosus); спустя 1, 2, 3, 4, 5 ч животных декапитировали под легким эфирным наркозом. Изолированные и многократно промытые селезенки объединяли и использовали для выделения лимфоцитов из клеточной суспензии центрифугированием в градиенте плотности фикол 400-верографин 12 и в количестве 10⁷ клеток на 1 мл суспензии преинкубировали при 37^oС в 0,1 М растворе трис-HCl- буфера (pH 7.4) в смеси со средой 199 (соотношение 1 : 4) в присутствии митогена конканавалина А (6 мкг/мл). В мембранах лимфоцитов, полученных методом осмотического шока и осажденных центрифугированием, определяли содержание МДА [4].
   Анализ данных заключается в вычислении и сравнении описательных статистик в каждой подгруппе (5 уровней времени). Проверка нормальности распределения, показанная в таблице 1, проведенная с помощью критерия Шапиро-Уилка, подтвердила нормальность распределения во всех группах по всем признакам. Для проверки статистических гипотез равенства средних в разные периоды времени использовался классический дисперсионный анализ (ANOVA). В случае отвержения гипотезы равенства средних использовался метод линейных контрастов Шеффе. Критический уровень значимости принимался равным 5% [5, 6]. Результаты проведенных исследований выявляют принципиально новую информацию по двум группам данных, касающихся количественных изменений МДА/мг белка в течение 5 ч в аскорбат-зависимой (неферментативной) (МДА1) и NADPH-зависимой (ферментативной) (МДА2) системах. В случае превышения уровня значимости Pr < W над величиной 0.05 (т.е. 5%), мы руководствуемся нулевой гипотезой о нормальности данного признака в данной подгруппе. Анализ полученных результатов при подобном подходе позволяет сделать заключение о подчиненности всех изученных признаков по исследованным подгруппам нормальному распределению, что и послужило основанием для использования параметрический дисперсионный анализ - ANOVA для сравнения средних групповых (табл.2).
   Данные, приведенные в табл. 2, построены на сравнении дисперсий, порождаемых внутригрупповой и межгрупповой вариациями с использованием F-критерия Фишера. Исходя из смысла фактора можно сформулировать нулевую гипотезу, согласно которой среднее количество МДА при отравлениях МТЗ не демонстрирует заметных различий в аскорбат- и NADPH-зависимой системах переокисления липидов, несмотря на то, что альтернативная гипотеза допускает возможность существования таких различий. В случае, когда Pr > F < 5%, гипотеза о равенстве генеральных средних отклоняется.

                                                                                                                                                        Таблица 1

Результаты проверки нормальности распределения признаков
в сравниваемых группах (МДА1 и МДА2)

Примечание.  N – число непропущенных значений признака МДА1 и МДА2 в данной подгруппе. Mean – среднее арифметическое; Sum – сумма значений анализируемого признака (МДА1 и МДА2) в данной подгруппе, Std  Dev – стандартное отклонение,  Variance – вариация, Skewness – асимметрия,  Kurtosis – эксцесс, CV – коэффициент вариации, W – значение критерия Шапиро-Уилка для проверки нормальности распределения; Pr<W – достигнутый уровень значимости для данного критерия.

                                                                                                                                        Таблица 2

Параметрический дисперсионный анализ - ANOVA

   Примечание. SS - сумма квадратов, MS - средний квадрат, SS Error - ошибка суммы квадратов, R-Square - коэффициент детерминации, показывающий силу связи между фактором Т и зависимой переменной МДА1 или МДА2, MS Error - ошибка средних квадратов, F - критерий Фишера, Pr > F - уровень значимости при данном критерии.

   Из табл. 2 вытекает, что Pr > F оказывается значительно меньше величины 0.05 (5%), что свидетельствует о правильности отказа от применения нулевой гипотезы. При внутригрупповом попарном сравнении генеральных средних при помощи теста Шеффе (табл. 3, 4) становится очевидным наличие довольно интенсивно совершающегося процесса изменения количества МДА в обеих системах перекисеобразования, особенно в аскорбат-зависимой. R-Square - показатель, называемый коэффициентом детерминации, показывающий силу связи между фактором (время Т) и зависимой переменной (МДА1 и МДА2). Его значение изменяется от 0 до 1. Очевидно, что этот показатель подчеркивает очень большую зависимость между этими двумя признаками. С каждым последующим часом его среднее значение достаточно сильно меняется (рис. 1 и 2). В период времени переокисления от Т1 к Т2 и Т3 до Т5 наиболее интенсивно совершающиеся изменения в значениях МДА отличаются в аскорбат-зависимой системе, в то время как ко второму и третьему часу их значения оказываются максимально приближенными. Количество же МДА в NADPH -зависимой системе также обнаруживает время-зависимый рост с каждым часом, с наиболее резким скачком в интервале между 3-им и 4-ым часом. Проверка по Шеффе говорит о наличии статистически значимого различия между средними на 3-й и 4-й час наблюдения. Хотя средние и близки, но они все же статистически значимо различаются.

                                                                                                                                Таблица 3