УДК 577.23

   Фракция супероксидпродуцирующего липопротеина - супрола, полученная из сыворотки крови млекопитающих (человек, бык, крыса), является НАДРН-содержащим липопротеином высокой плотности, способным продуцировать супероксидные анион-радикалы (O₂^-) in vivo и in vitro [1-3]. Его стабильность в сыворотке плацентарной крови человека выше, нежели у белых крыс, что создает определенные трудности в проведении экспериментальных исследований над этими животными. Истинная физиологическая функция супрола млекопитающих пока остается неясной, хотя уже известна его роль в холестеринтранспортирующей активности клеток [4,5]. С другой стороны, будучи энергичным O₂^--продуциентом супрол может быть также активно действующим компонентом иммунной системы, наподобие других O₂^--продуцирующих систем крови типа цитохромов B₅₅₈, локализованных в мембранах фагоцитирующих лейкоцитов и лимфоцитов [6,7]. Определены характерные количественные и качественные изменения супрола как чувствительного маркера оксидативного стресса различного происхождения [8-10], в частности, как фактора сыворотки плацентарной крови человека, подавляющего рост лимфосаркомы Плисса и демонстрирующего дозозависимый стимулирующий или ингибирующий эффект в отношении пролиферации клеток куриного эмбриона in vitro [2]. Для исследования результативности действия супрола как энергичного генератора O₂^- в различных биосистемах необходимо повышать его стабильность, что пока трудно осуществимо, или пойти по пути поиска соответствующих биоисточников, из которых можно было бы выделить его в больших количествах и с достаточно высоким уровнем стабильности. В этой связи определенный интерес представляет исследование крови водных обитателей, в частности, рыб, у которых уровень O₂^--продуцирующих биосистем (в лице цитохромов B₅₅₈ крови) намного превышает таковой у млекопитающих [11].
   Целью работы явилось получение супрола из сыворотки крови рыбы сиг (Coregonus lavaretus) из оз. Севан и определение некоторых его характерных физико-химических свойств.
   Кровь живых рыб забирали проколом шейной части и стабилизировали 2%-ным раствором оксалата натрия в объемном соотношении 1:5 при постоянном легком встряхивании. Выделение и очищение супрола в основном осуществляли известным методом [12], с небольшим видоизменением с целью повышения выхода фракции супрола; были использованы метод ионообменной хроматографии на целлюлозах ДЕ-52 и КМ-52 ("Whetman", Англия) и сефадексе ДЕАЕ А-50 ("Pharmacia", Швеция), а также центрифуги К-24 и К-70 (Германия) и хроматографические стеклянные колонки различных размеров (3х10, 4х20, 1х10 см). Оптические спектральные измерения осуществляли на спектрофотометре "Specond UV VIS" (Германия) с длиной оптического пути 1 см.
   Супероксидпродуцирующую активность супрола определяли с использованием нитротетразолиевого синего (НТС) с расчетом процента увеличения плотности оптического поглощения формазана (при 560 нм), образующегося при восстановлении НТС супероксидными радикалами. За единицу O₂^--продуцирующей активности принимали количество фракции супрола, способное увеличить плотность оптического поглощения формазана при 560 нм в пределах 50%. Отделившуюся от 20 мл крови сыворотку подвергали дополнительному центрифугированию при 10000 об/мин в течение 10 мин и диализу с целью удаления следов компонентов плазмы, после чего для изоляции следов сопутствующих белков основного характера супернатант пропускали через колонку с КМ-52, уравновешенную 0.005 М калий фосфатным буфером, рН 7.4 (КФБ). Не осевшую на этой колонке фракцию, уравновешенную 0.005 М КФБ, пропускали через сефадекс ДЕАЕ А-50 для полного освобождения от следов кислых белков. Не задерживающейся на этой колонке фракцией является супрол (20 мл), с плотностью оптического поглощения при 530 нм 0.4 и с O₂^--продуцирующей активностью 22 ед/мл фракции.
   Результаты проведенных исследований (рис. 1) демонстрируют существенные различия между оптическими спектрами поглощения супрола рыбы сиг и млекопитающих. В отличие от млекопитающих [3] фракция супрола рыбы сиг, имеющая характерную для липопротеинов опалесценцию, входит в комплексное соединение с сывороточным цитохромом B₅₅₈ [13], участвуя в продукции O₂^- без активирования следов ионов переходных металлов (Fe⁺³, Cu⁺²). С другой стороны, налаживание спектров супрола (он имеет слабое поглощение при 430 нм) и сывороточного цитохрома B₅₅₈ (в очищенном виде имеет поглощение при 412, 530, 560 нм [13]) приводит к определенному повышению фона поглощения спектра комплекса супрола с цитохромом B₅₅₈ сыворотки в области волн при 400-500 нм, как это показано на рис. 1, с некоторым видоизменением спектра "чистого" цитохрома B₅₅₈. Скорее всего супрол рыб в элементарном акте продуцирования O₂^- использует Fe⁺³ гемовой группы цитохрома B₅₅₈ согласно следующей схеме: