УДК 577.15
Изменение активности щелочной и кислой фосфатаз
под
влиянием пролинбогатых полипептидов
(Представлено 24/ХII 2001)
Из нейросекреторных гранул нейрогипофиза А.
А. Галояном и сотр. в индивидуальном виде был выделен ряд новых полипептидов и
расшифрована их первичная структура [1]. Эти соединения оказались С-конечными
фрагментами предшественников нейрофизина-II, которые образуются внутри
нейросекреторных гранул частичным протеолизом под влиянием протеолитических
ферментов по ходу аксонального транспорта из гипоталамуса в нейрогипофиз и
богаты пролином [2]. Пролинбогатые полипептиды (ПБП) активируют утилизацию
глюкозы, превращение углеводов гликолитическим путем, а также биосинтез
фосфолипидов и т.п. [3,4]. ПБП принимает активное участие в регуляции иммунной
системы, и в частности иммунокомпетентных клеток
организма.
В настоящем исследовании мы
задались целью изучить активность щелочной и кислой фосфатаз в различных органах
белых крыс под влиянием ПБП in vitro, учитывая исключительную важность процессов
фосфорилирования и дефосфорилирования белков цитоплазмы иммунокомпетентных
клеток.
Опыты проводили на почках, печени,
сердце и мозге белых крыс-самцов линии Вистар массой 150-180 г. Животных
декапитировали, на холоду быстро извлекали исследуемые органы, промывали
охлажденным физиологическим раствором, взвешивали определенное количество ткани
и на холоду гомогенизировали в дистиллированной воде микроизмельчателем типа
Уоринга.
Активность щелочной и кислой
фосфатаз в гомогенатах определяли по методу Боданского [5]. В качестве субстрата
брали b-глицерофосфат Na в мединоловом буфере, pH
9.6 для щелочной фосфатазы и 4.6 - для кислой. Неорганический фосфор
определяли по методу Лоури и Лoпесса [6]. Разведение гомогената производили из
расчета 1 г свежей ткани в 10 мл дистиллированной воды для печени, сердца и
мозга и 20 мл - для почек. Реакционная смесь состояла из 1 мл гомогената, 5 мл
субстрата буфер, 0.25 мл (40 g) исследуемого вещества.
После одночасовой инкубации при 370C в пробы добавляли по 2 мл
40%-ной трихлоруксусной кислоты и в безбелковом фильтрате определяли
неорганический фосфор, т.е. из фильтрата брали по 2 мл гомогената, добавляли 2
мл 2.5%-ного раствора молибдата аммония на серной кислоте, 1 мл 0.5%-ной
аскорбиновой кислоты и доводили водой до 10 мл. После 5-минутной инкубации
немедленно определяли активность фермента. Осаждение белков, фильтрацию и
определение неорганического фосфора производили в холодных условиях. Пробы
колориметрировали на ФЭК-М фильтром красным, кювет 0.5 см (длина волны 630
нм).
Активность фосфатазы выражали в мг
неорганического фосфора, отщепившегося от b-глицерофосфата Na в течение одного часа инкубации при
370C на 1 г сырой ткани.
Результаты, полученные при определении активности щелочной и кислой
фосфатаз in vitro в почках, печени, сердце и мозге под влиянием препарата ПБП,
представлены в таблице
Измениние активности кислой (КФ) и щелочной (ЩФ) фосфатаз
под
влиянием препарата ПБП в почках, печени, сердце и мозге белых крыс,
мг
Р/г сырой ткани
Орган | Норма | Препарат ПБП, 10-9М | Разница, % |
Почки | |||
КФ | 49.75±5.27 | 62.75±10.5 P < 0.1 | 26 |
ЩФ | 50.25±7.0 | 95.6±6.9 P < 0.01 | 90 |
Печень | |||
КФ | 32.12±2 | 44.15±4.9 P < 0.05 | 37 |
ЩФ | 13.0±2.43 | 20.0±3.9 P < 0.2 | 53 |
Сердце | |||
КФ | 15.25±5.46 | 19.25±4.48 P < 0.5 | 26 |
ЩФ | 22.95±2.4 | 27.7±4.9 P < 0.5 | 20 |
Мозг | |||
КФ | 22.0±6.8 | 24.0±5.9 P < 0.05 | 9 |
ЩФ | 37.5±6.9 | 26.5±4.9 P < 0.2 | -30 |
Степень активации ПБП в исследуемых тканях оказалась различной.
Активность щелочной фосфатазы резко повышается в почечной ткани (90%), несколько
меньше (53.8%) - в печеночной. Сердечная ткань активируется только лишь на
20.7%. Однако в мозговой ткани щелочная фосфатаза ингибируется на
30%
Судя по полученным данным, ПБП понижает
активность щелочной фосфатазы мозговой ткани белых крыс, несмотря на то
обстоятельство, что последняя менее подвержена изменениям под воздействием
различных реагентов, в том числе и препарата фрагмента b-цепи Hb-а и в кислой среде.
Институт биохимии им. Г. Х. Бунятяна НАН РА
1. Galoyan A. A. Biochemistry of Novel cardioacteve hormones and immunomodulators of the
functional system neurosecretory hypothalamus-endocrine heart. Moscow. Nauka.
1997.
2. Galoyan A. A. -Signal moleculs neurochemical Research. 2000. V. 25. N.9/10. P.
1343-1355.
3. Kevorkian G. A.,
Kanayan A. S., Hayrapetyan R. L., Guevorkian A. G., Marukhyan G. L., Avanesyan
S. A., Manukyan L. A., Voskanian L. H., Galoyan A. A. In:
"Biochemical and molecular-biological aspects of the brain Immune System" &
Sept. 15-19. 2001. Yerevan-Tsakhadzor. P. 86-94.
4. Ghazaryan P. A., Ghazaryan A. P., Galoyan A. A. In: "Biochemical andinolecular-Biological aspects of the brain immune
system". Sept. 15-19. 2001. Yeravan-Tsakhadzor. P. 115-126.