БИОХИМИЯ

УДК 577.15

А. Е. Арутюнян, Л. В. Саркисян, С. С. Алексанян, академик А. А. Галоян

Изменение активности щелочной и кислой фосфатаз
под влиянием пролинбогатых полипептидов

(Представлено 24/ХII 2001)

   Из нейросекреторных гранул нейрогипофиза А. А. Галояном и сотр. в индивидуальном виде был выделен ряд новых полипептидов и расшифрована их первичная структура [1]. Эти соединения оказались С-конечными фрагментами предшественников нейрофизина-II, которые образуются внутри нейросекреторных гранул частичным протеолизом под влиянием протеолитических ферментов по ходу аксонального транспорта из гипоталамуса в нейрогипофиз и богаты пролином [2]. Пролинбогатые полипептиды (ПБП) активируют утилизацию глюкозы, превращение углеводов гликолитическим путем, а также биосинтез фосфолипидов и т.п. [3,4]. ПБП принимает активное участие в регуляции иммунной системы, и в частности иммунокомпетентных клеток организма.
   В настоящем исследовании мы задались целью изучить активность щелочной и кислой фосфатаз в различных органах белых крыс под влиянием ПБП in vitro, учитывая исключительную важность процессов фосфорилирования и дефосфорилирования белков цитоплазмы иммунокомпетентных клеток.
   Опыты проводили на почках, печени, сердце и мозге белых крыс-самцов линии Вистар массой 150-180 г. Животных декапитировали, на холоду быстро извлекали исследуемые органы, промывали охлажденным физиологическим раствором, взвешивали определенное количество ткани и на холоду гомогенизировали в дистиллированной воде микроизмельчателем типа Уоринга.
   Активность щелочной и кислой фосфатаз в гомогенатах определяли по методу Боданского [5]. В качестве субстрата брали b-глицерофосфат Na в мединоловом буфере, pH  9.6 для щелочной фосфатазы и 4.6 - для кислой. Неорганический фосфор определяли по методу Лоури и Лoпесса [6]. Разведение гомогената производили из расчета 1 г свежей ткани в 10 мл дистиллированной воды для печени, сердца и мозга и 20 мл - для почек. Реакционная смесь состояла из 1 мл гомогената, 5 мл субстрата буфер, 0.25 мл (40 g) исследуемого вещества. После одночасовой инкубации при 370C в пробы добавляли по 2 мл 40%-ной трихлоруксусной кислоты и в безбелковом фильтрате определяли неорганический фосфор, т.е. из фильтрата брали по 2 мл гомогената, добавляли 2 мл 2.5%-ного раствора молибдата аммония на серной кислоте, 1 мл 0.5%-ной аскорбиновой кислоты и доводили водой до 10 мл. После 5-минутной инкубации немедленно определяли активность фермента. Осаждение белков, фильтрацию и определение неорганического фосфора производили в холодных условиях. Пробы колориметрировали на ФЭК-М фильтром красным, кювет 0.5 см (длина волны 630 нм).
   Активность фосфатазы выражали в мг неорганического фосфора, отщепившегося от b-глицерофосфата Na в течение одного часа инкубации при 370C на 1 г сырой ткани.
   Результаты, полученные при определении активности щелочной и кислой фосфатаз in vitro в почках, печени, сердце и мозге под влиянием препарата ПБП, представлены в таблице

 

Измениние активности кислой (КФ) и щелочной (ЩФ) фосфатаз под
влиянием препарата ПБП в почках, печени, сердце и мозге белых крыс,
мг Р/г сырой ткани

Орган Норма Препарат ПБП, 10-9М Разница, %
Почки
КФ 49.75±5.27 62.75±10.5  P < 0.1 26
ЩФ 50.25±7.0 95.6±6.9   P < 0.01 90
Печень
КФ 32.12±2 44.15±4.9  P < 0.05 37
ЩФ 13.0±2.43 20.0±3.9   P < 0.2 53
Сердце
КФ 15.25±5.46 19.25±4.48  P < 0.5 26
ЩФ 22.95±2.4 27.7±4.9   P < 0.5 20
Мозг
КФ 22.0±6.8 24.0±5.9  P < 0.05 9
ЩФ 37.5±6.9 26.5±4.9   P < 0.2 -30

   Степень активации ПБП в исследуемых тканях оказалась различной. Активность щелочной фосфатазы резко повышается в почечной ткани (90%), несколько меньше (53.8%) - в печеночной. Сердечная ткань активируется только лишь на 20.7%. Однако в мозговой ткани щелочная фосфатаза ингибируется на 30%
   Судя по полученным данным, ПБП понижает активность щелочной фосфатазы мозговой ткани белых крыс, несмотря на то обстоятельство, что последняя менее подвержена изменениям под воздействием различных реагентов, в том числе и препарата фрагмента b-цепи Hb-а и в кислой среде.
   Институт биохимии им. Г. Х. Бунятяна НАН РА

Литература

   1. Galoyan A. A. Biochemistry of Novel cardioacteve hormones and immunomodulators of the functional system neurosecretory hypothalamus-endocrine heart. Moscow. Nauka. 1997.
   2. Galoyan A. A. -Signal moleculs neurochemical Research. 2000. V. 25. N.9/10. P. 1343-1355.
   3. Kevorkian G. A., Kanayan A. S., Hayrapetyan R. L., Guevorkian A. G., Marukhyan G. L., Avanesyan S. A., Manukyan L. A., Voskanian L. H., Galoyan A. A. In: "Biochemical and molecular-biological aspects of the brain Immune System" & Sept. 15-19. 2001. Yerevan-Tsakhadzor. P. 86-94.
   4. Ghazaryan P. A., Ghazaryan A. P., Galoyan A. A. In: "Biochemical andinolecular-Biological aspects of the brain immune system". Sept. 15-19. 2001. Yeravan-Tsakhadzor. P. 115-126.