Причиной задержки могут быть также хромосомные аберрации, возникающие в клетках под влиянием облучения; деспирализация хромосом и превращение их в интерфазные, вследствие чего клетки из профазы "возвращаются" к интерфазе; нарушения синтеза белков, участвующих в митозе, особенно в синтезе центриолов [4].

    В течение первых нескольких часов после облучения, благодаря работе репарационной системы клетки, восстанавливается часть повреждений, и клеточная популяция переходит в log-фазу роста.
   Стационарная фаза роста у облученных дрожжей устанавливается опять с 2-часовой задержкой, хотя с приближением к стационарной фазе роста различия в количествах биомассы между облученными и необлученными клетками практически исчезают.
    С целью сравнительного исследования кинетических параметров роста дрожжевых клеток определен коэффициент удельного роста (m) в разных фазах пострадиационной инкубации (табл.1). Как свидетельствуют полученные данные, коэффициент удельного роста в ранней log-фазе составляет 0.39±0.03 для необлученных и 0.23±0.03 для облученных клеток. В поздней log-фазе коэффициент m приобретает значения 0.55±0.02 и 0.37±0.03 соответственно для необлученных и облученных клеток. Таким образом, как в ранней, так и поздней log-фазах коэффиецент удельного роста для облученных дрожжей меньше по сравнению с необлученными клетками, причем разность почти одинакова - Dm = 0.16 и 0.18 соответственно. Определены также значения времени удвоения биомассы в разных фазах роста. Для необлученных клеток в ранней log-фазе оно составляет 1.78 ч, а в поздней - 1.26 ч. Облученные клетки по этому параметру также уступают необлученным клеткам: в ранней log-фазе время удвоения составляет 3 ч, а в поздней - 1.87 ч.

Примечания. - показания ФЭК сняты после разбавления раствора в 10¹⁰ раз

   Данные, полученные при исследовании темпов колониеобразования у дрожжей C.guilliermondii НП-4 (рис.4), подтверждают результаты исследования динамики роста необлученных и облученных клеток. Как видно из графика, в случае облученных клеток имеет место падение темпов роста по сравнению с необлученными. Соответствующие количественные данные, приведенные в табл.2, свидетельствуют, что во всех фазах пострадиационной инкубации наблюдаются различия в темпах роста необлученных и облученных дрожжей. Так, для необлученных клеток в ранней log-фазе наблюдается увеличение числа колоний примерно в 300 раз, а для облученных клеток - всего в 7 раз. В поздней log-фазе для необлученных клеток наблюдается удвоение числа колоний, а в случае облученных клеток число колоний увеличивается примерно в 25 раз. В стационарной фазе роста не наблюдается значительного изменения числа колоний в обоих вариантах клеток. Таким образом, по сравнению с начальной точкой в стационарной фазе роста имеет место увеличение числа колоний примерно в 700 раз для необлученных и в 170 раз для облученных клеток.
    Обобщая полученные нами данные по колониеобразованию, можно предположить, что у необлученных дрожжей интенсивный рост наблюдается в ранней log-фазе роста. Для облученных клеток в этой фазе наблюдается падение темпов роста, а более интенсивный рост наблюдается в поздней log-фазе. Эти данные подтверждают наблюдаемую нами в динамике роста облученных дрожжей картину 2-часовой задержки log и стационарной фаз. Одновременно из данных табл.2 явствует, что темпы накопления биомассы вместе с ростом числа колоний закономерно увеличиваются (примерно в 3 раза). Однако в стационарной фазе роста не наблюдается значительных различий в отношении количества биомассы необлученных и облученных дрожжей. Это можно объяснить наличием небольшого количества бурно растущих клеток или образованием гигантских клеток в популяции облученных дрожжей.
    Таким образом, исследования по выживаемости дрожжевых клеток рода Candida, подвергнутых рентгеновскому облучению, показали, что у дрожжей C.guilliermondii НП-4 под влиянием рентгеновского облучения наблюдается падение выживаемости по сигмоидной кривой, что не характерно для низших эукариот. Одной из причин этого может быть принадлежность исследованных дрожжей к числу многоядерных организмов. Предполагается, что под влиянием рентгеновского облучения в ДНК происходят однонитевые разрывы, которые в процессе пострадиационной инкубации превращаются в двунитевые разрывы вследствие так называемой "неправильной репарации" [5]. Участок падения на кривых выживаемости соответствует периоду максимального проявления разрывов, когда выживаемость клеток должна быть наименьшая. Дальнейшая инкубация поврежденных клеток, по-видимому, протекает с репарацией ДНК, вследствие чего темпы роста биомассы постепенно увеличиваются и примерно к 20-му ч доходят до таковых у необлученных клеток. Одновременно постепенно восстанавливается способность колониеобразования. Однако в этом случае даже после 20-часовой инкубации облученные клетки по способности колониеобразования примерно в 3 раза уступают необлученным. Возможно, что после облучения в результате репарации ДНК возникает небольшое количество клеток, образующих колонии, которые отличаются бурным ростом. Возможно также, что высокое значение количества биомассы у облученных дрожжей в конце инкубации является не результатом интенсивного роста клеток, а следствием образования гигантских клеток.

    Ереванский государственный университет
    Институт молекулярной биологии НАН РА