Анализ митотического режима клеточной линии НГУК-1 в присутствии нейропептида ПБП позволяет сделать вывод о некоторой стимуляции пролиферативной активности культуры данным препаратом на фоне снижения числа патологических митозов и незначительного увеличения количества гигантских клеток (рис. 1, б).

   При электронно-микроскопическом исследовании НГУК-1 в присутствии ПБП в концентрации 5×10^-3М через 24 ч наблюдали клетки с ячеистой структурой цитоплазмы вследствие расширенных полостей гладкого эндоплазматического ретикулума (рис. 2). В контроле таких изменений не отмечается (рис. 3).

   При концентрации пептида ПБП 5×10^-5М в культуре на ультратонких срезах выявлены фрагменты разрушенных электронноплотных ядер, окруженных мембранами, что указывает на наличие начальных стадий апоптоза опухолевых клеток (рис. 4).

   Таким образом, в условиях in vitro ПБП в концентрациях 5×10^-3-10^-7М оказывает подавляющее влияние на фибробласты L₉₂₉ Jurkat клеток и на клетки невриномы Гассерова узла крысы.
   Электронно-микроскопические исследования выявляют признаки ячеистой структуры цитоплазмы вследствие расширения полостей гладкого эндоплазматического ретикулума. Фрагменты разрушенных электронноплотных ядер, окруженных мембранами, указывают на наличие начальных стадий апоптоза этих опухолевых нервных клеток (НГУК-1). В случае с опухолевыми клетками фибробластов (L₉₂₉) ПБП в концентрации 5×10^-5М изменяет ультраструктуру как зрелых, так и незрелых опухолевых клеток. Для зрелых клеток эти изменения заключаются в резком расширении агранулярной цитоплазматической сети, фрагментации ядра и цитоплазмы, разрушении внутренних мембран набухших митохондрий.
   Что же касается незрелых клеток, то они подвергаются другому виду изменений - в ультраструктуре появляются пикнотические ядра, ядра с кариорексисом и кариолизисом, резко выражен микроплазматоз. Ультрамикроскопические данные показывают разрушение типа апоптоза как в нервных опухолевых, так и опухолевых клетках фибробластов (L₉₂₉). При этом наблюдается подавление митотической активности клеток L₉₂₉. Хотя мы не проводили электронно-микроскопических исследований опухолевых клеток Т-лимфоцитов человека (Jurkat cells) при воздействии ПБП в культуре клеток, однако мы констатировали дозозависимое угнетающее влияние ПБП на пролиферацию этих клеток, что согласуется с данными по влиянию ПБП на культуру опухолевых клеток фибробластов (L₉₂₉) in vitro. Вместе с тем ПБП потенцирует ИЛ-2 зависимые функции лимфоцитов человека в культуре.
   Ранее мы показали, что ПБП в концентрации 5×10^-5М подавляет КонА стимулируемую реакцию бласт-трансформации тонзилярных лимфоцитов человека в культуре, хотя сам КонА стимулирует бласт-трансформацию. Интерлейкин-2 также стимулирует бласт-трансформацию лимфоцитов, но в отличие от КонА при сочетании ИЛ-2 с ПБП значительно увеличивает содержание бласт-трансформированных клеток. Такая же картина наблюдается при изучении влияния ПБП на активность лимфокин-активированных киллеров, а также на антигензависимую Т-клеточную цитотоксичность при наличии экзогенного интерлейкина-2. Таким образом, ПБП потенцирует ИЛ-2 зависимые функции лимфоцитов человека в культуре. Более того, ПБП стимулирует образование антител против ряда микроорганизмов в условиях как in vitro, так и in vivo [5].
   Наши опыты по изучению влияния ПБП на лимфоциты периферической крови человека различного возраста и пола, на ИЛ-2 индуцируемую клеточную пролиферацию мононуклеарных клеток показали, что Т-клеточные ответы на фитогемагглютинин при добавлении ПБП в культуру клеток происходит следующим образом: низкоотвечающие доноры реагируют усилением пролиферационного ответа, тогда как у лиц с высоким уровнем Т-клеточной пролиферации на ФГА тестируемый пептид в той или иной мере угнетает ответ на клеточный митоген. В нормальных лимфоцитах человека ПБП не вызывает патологических морфологических или функциональных сдвигов, а скорее оказывает модулирующее действие на лимфоциты цельной крови. Мы показали, что при перерезке спинного мозга и воздействии змеиного яда, когда происходят дегенеративно-некротические процессы нейронов, ПБП восстанавливает не только функцию нейронов (электрическая активность), но и всю морфологическую картину как интер-, так и мотонейронов [2,3].
   Хотя трудно делать определенные выводы о механизме влияния ПБП на ультраструктуру различных видов клеток, однако полученные данные свидетельствуют о наибольшем сходстве с действием ПБП на указанные виды опухолевых клеток. В настоящее время А.А. Галояном и сотр. проводятся широкие биохимические, нейроиммунохимические и генетические исследования для выяснения роли ligand-gated каскадной системы в опухолевых лимфоцитах и нейронах, приводящих к апатотическим сдвигам этих клеток. В этом отношении большой интерес вызывало влияние ПБП на активность каспаз. Объектом была культура нейробластомы N2A, обладающая нейроноподобными свойствами. Опыты показали, что ПБП в концентрации 10^-9М оказывает разнонаправленное влияние на активность каспаз (2, 6, 3 и 9 нейробластомы N2A в культуре). ПБП подавляет эффекторные ферменты каспаз 3 и 9, значительно активируя каспазы 2 и 6, совершенно не действуя на активность каспаз 8. Причем ПБП не меняет активность влияния указанных каспаз на недифференцированные нейробластомы. После дифференцировки этих клеток бутиратом ПБП воздействует на их активность [12].
   Возникает два вопроса: 1) чем отличаются генетически и биохимически дифференцированная и недифференцированная нейробластомы, 2) почему ПБП оказывает нейропротекторное влияние на клетки спинного мозга, но разрушает опухолевые клетки (НГУК-1) и фибробласты L₉₂₉?
   По-видимому, ПБП может оказывать влияние на жизнедеятельность различных лимфоцитов и других клеток на различных уровнях их дифференцировки и функционального состояния, о чем свидетельствуют данные о влиянии ПБП на активность лимфоцитов крови разных доноров [6]. ПБП обладает также свойствами NGF, оказывая влияние как на нейроны, так и на глиальные клетки и стимулируя образование GFAP в глиальных клетках и интерлейкинов в астроцитах. Зачастую трансформированные клеточные линии, так же как малиглинизирующие клетки, изолированные из опухолей, являются более чуствительными к проапоптотическим стимулам, чем нормальные клетки [13].
   Проведенные исследования позволили нам сделать следующие выводы:
   1. Нейропептид ПБП в концентрации 5-10^-9М через 24 ч не вызывает изменений морфологии клеточной культуры НГУК-1 на светооптическом уровне.
   2. ПБП оказывает слабовыраженный митогенный эффект на НГУК-1, не провоцируя дополнительных форм патологических митозов, характерных для данной опухолевой линии.
   3. ПБП вызывает сравнительно небольшое увеличение числа гигантских клеток в культуре НГУК-1, что свидетельствует о нарушении цитотомии.
   4. Нейропептид в концентрации 5-10^-3 и 5-10^-5М оказывает цитотоксическое действие на отдельные опухолевые клетки, что проявляется в виде картин клеточной деструкции и апоптоза (электронно-микроскопическое исследование).

   Институт биохимии им. Г.Х. Бунятяна НАН РА
   Институт морфологии человека РАМН