Известно, что развитие опухолевой прогрессии в организме представляет собой многоэтапный процесс, затрагивающий многочисленные стороны жизнедеятельности организма и вызывающий разнообразные изменения в биохимическом, иммунологическом, генетическом и бактериологическом статусе организма.
   Основным постулатом теории онкогенеза является положение о клеточном онкогенезе как причине опухолевой трансформации клетки [1,2].
    Ранее нами была показана возможность индуцирования опухолевого роста в слизистой оболочке толстой кишки лабораторных животных (белые крысы) при введении последним ДНК, выделенной из аденокарциномы толстой кишки человека [3,4]. Полученные в этих экспериментах результаты позволили констатировать ряд положений:
   1. возможность экспрессии ДНК в чужеродном организме;
   2. выраженное тканеспецифичное свойство опухолевой ДНК;
   3. возможность создания экспериментальной моноцентричной модели
       опухоли толстой кишки человека у животных.
   В настоящей работе сделана попытка изучить возможные механизмы экспрессии опухолевой ДНК, а также охарактеризовать биохимический и иммунный статус животных с индуцированным опухолевым ростом.
   Эксперименты проводили на 130 белых беспородных лабораторных крысах массой 160-200гр. Активность ферментов (ЩФ, КФК, ГГТП, ЛДГ) количественный баланс сывороточных белков: (общий белок, альбумин) определяли в биохимическом анализаторе FP-901, количественную характеристику сывороточных иммуноглобулинов определяли по методу Манчини.
   ДНК из опухоли толстой кишки человека и слизистой оболочки толстой кишки (СОТК) крыс выделяли по известному методу [3]. Молекулярную гибридизацию ДНК осуществляли по Саузерну [5]. В экспериментах по индуцированию неопластических изменений в СОТК животных при помощи опухолевой ДНК была установлена выраженная тканевая специфичность опухолевой ДНК - индукция неопластических изменений только в гомологичном органе у животных. В настоящее время имеются единичные сообщения о тканевой специфичности онкогенов. Так, установлена выраженная тканевая специфичность онкогенов на примере ретровирусов. Определенную тканевую специфичность проявляют также клеточные онкогены [6-8]. В наших экспериментах опухолевая ДНК, введенная животным внутрибрюшинно (в/бр), могла попасть в клетки различных органов брюшной полости, однако свою трансформирующую активность проявляет только в гистологически гомологичных структурах.

   Для ответа на вопрос, каким путем опухолевая ДНК человека, введенная животным, индуцирует у последних опухолевый рост, нами был осуществлен гибридизационный анализ ДНК из трансформированных клеток СОТК крыс. В качестве зонда гибридизации использовали Alu-фрагмент ДНК (Alu-повторы - последовательности человеческой ДНК вследствие высокой частоты повторяемости являются удобным зондом для идентификации фрагментов генома человека в трансформированных клетках).
   Результат гибридизации фрагментов ДНК крысы и человека с меченными в системе НИК-трансляции Alu-повторами человека представлен на рисунке, на котором отчетливо видно, что ДНК, выделенная из СОТК крысы с индуцированными неопластическими изменениями в отличие от ДНК из СОТК интактных крыс содержит в своем составе нуклеотидные последовательности, гибридизуюшиеся с Alu-последовательностями человека. Полученный результат однозначно указывает на интеграцию фрагментов опухолевой ДНК человека в геном клеток крысы с последующей экспрессией. Способность генов активно работать после переноса между клетками животных, даже принадлежащих к разным классам, показана также в исследованиях по гибридизации соматических клеток [9]. Гены, являющиеся чужеродными для того или иного вида животных, продолжают нормально работать, как показано в случае с генами интерферона и соматостатина [10].
   Следующая серия экспериментов была посвящена изучению биохимического и иммунного статуса животных с индуцированным опухолевым ростом в толстой кишке. Проведен анализ активности таких ферментов, как щелочная фосфатаза (ЩФ), креатинфосфокиназа (КФК), гаммаглутамилтранспептидаза (ГГТП) и лактатдегидрогеназа (ЛДГ). Определяли также количественное содержание общего белка и альбумина у подопытных животных. Результаты этих исследований суммированы в табл. 1.

                                                                                                                                      Таблица 1

Группа Активность ферментов Е/л (x10)     ЩФ    КФК    ГГТП   ЛДГ Интактные животные (контроль), n=40 22,5±1,2  23,7±2,21 2,4±0,91 21,2±0,91 Животные с индуцированным опу- холевым ростом, n=40 37,3±1,02 (1,6 раз) 30,1±1,12 (1,2 раза) 5,6±1,44 (2,3 раза) 35,1±0,98 (1,6 раза)

   Как видно из таблицы, активность изученных ферментов в опытной группе животных значительно повышена, что находится в полном соответствии с данными других авторов относительно активности ферментов при опухолевом росте. В то же время количественный баланс сывороточных белков, общего белка и альбумина выраженно снижался в среднем в 1,3-1,5 раза, что также характерно при опухолевом росте [11].
   Анализ результатов по изучению состояния гуморального иммунитета животных с индуцированным опухолевым ростом выявил существенное понижение показателей иммунитета (табл. 2).
                                                                                                     

                                                                                                                                       Таблица 2

Группа Концентрация сывороточных иммуноглобулинов, мг/мл            IgA            IgM          IgG Интактные животные, n=40        1,6±0,23        0,61±0,31      6,4±1,12 Животные с ин- дуцированным опухолевым ростом, n=30        1,24±0,91        0,42±0,19      3,65±0,84

   Данные таблицы однозначно указывают на снижение иммунного ответа и понижение неспецифической резистентности организма, характерные для опухолевого роста в организме.
   Таким образом, полученные нами данные позволили уточнить механизм индукции опухолевого роста в толстой кишке крыс после в/бр введения опухолевой ДНК.
   Выявленные сдвиги в биохимическом и иммунном статусе экспериментальных животных, характерныe для опухолевого роста в организме, вкупе с результатами морфологических исследований, описанными в другой нашей работе [4], а также обнаружение фрагментов человеческой ДНК в геноме подопытной крысы позволяют охарактеризовать индуцированные неопластические изменения в СОТК.
   И наконец, индуцирование опухолевого роста вместе с выраженной тканевой специфичностью позволили создать новую экспериментальную, моноцентричную модель опухоли толстой кишки человека у животных.

   Ереванский государственный медицинский университет
   НИИ проктологии МЗ РА
   Институт молекулярной биологии НАН РА