Из нейросекреторных гранул гипоталамо-гипофизарной системы крупного рогатого скота впервые была выделена ножая группаполипептидов, так называемые пролин-богатые пептиды (ПБП), которые обладают сильно выраженными иммуномодуляторными свойствами [1,2]. Удалось выявить их первичную структуру. Предшествующим белком является нейрофизин-II-гликопротеин. Согласно Галояну нейросекреторные клетки гипоталамуса являются иммунокомпетентными клетками мозга, выполняющими функции T- и B-лимфоцитов, и в них образуются цитокины для регуляции функции иммунной системы самого мозга и периферической иммунной системы. Из указанных нейросекреторных гранул удалось выделить также интерлейкины (ИЛ-Ia, ИЛ-Ib, ИЛ-2, ИЛ-6) - фактор некроза опухолей (ФНО-а)[1]. Эти данные открывают новые горизонты развития нейроиммунологии.
   Цель настоящего исследования - изучить влияние одного из новых цитокинов, открытых Галояном и сотр. [1]: Ala-Glu-Ala-Pro-Glu-Pro-Ala-Glu-Pro-Ala-Glu-Pro-Glu-Val-Tyr на Mg²⁺- и Ca²⁺-активируемые АТРазы различных органов крыс. Ранее было показано, что этот пептид активирует макрофаги, защищает мышей от летальных доз грамотрицательных бактерий и других инфекций [2]. Более того, было установлено, что этот полипептид защищает от нейронального повреждения, вызванного змеиным ядом (Vipera raddej Boettger 1898)[5,6], и этот эффект превосходит эффект дексаметазона [6]. Очевидно, что ПБП может оказывать влияние на энергетический обмен и других органов. Поэтому мы изучали влияние ПБП как на Mg²⁺-, так и Ca²⁺-зависимую АТРазу мозга, печени, сердца и скелетной мышцы.
   Опыты проводили на митохондриях, выделенных из головного мозга, печени, сердца и скелетных мышц беспородных половозрелых крыс-самцов. Ядерную фракцию из гомогенатов различных тканей осаждали при 600-800 g в течение 10 мин. Митохондрианальную фракцию мозга выделяли при 18000, печени - при 9000, а миокарда и мышечной ткани - при 12000 g в течение 15 мин. Среда выделения митохондрий: 0,25 М сахарозы-0,02 М трис-HCl буфера, pH 7,4. Активность Mg²⁺- и Ca²⁺-АТРаз в изолированных митохондриях определяли по нарастанию неорганического фосфата в следующей инкубационной среде (2мл):1,6 мл 0,25 М сахарозы - 0,02 M трис-HCl-буфера, 0,2 мл суспензии митохондрии (соответствующей 2-3 мг белка), 4 мг АТР, растворенного в 0,2 мл 0,25 М сахарозы (pH 7,4), и 0,5 мМ Ca²⁺ или Mg²⁺. Конечная концентрация добавленного ПБП - 10^-9M. Время инкубации смеси 30 мин. Синтез указанного пептида был осуществлен в лаборатории Фелтера (Германия)[3]. Неорганический фосфат определяли по Лоури и сотр.[4] и пересчитывали на 1 мг белка. Определение белка проводили по Лоури и сотр. [5]. Полученные результаты обработаны статистически. Достоверность различий между средними величинами определяли по t-критерию Стъюдента [6].
                                                                                             

                                                                                                                                Таблица 1

     В табл.1 показан эффект влияния ПБП(10^-9) на Mg²⁺-АТРазу митохондрий мозга, печени, сердца и мышцы. Как видно из таблицы, статистически достоверно увеличивается активность Mg²⁺-АТРазы интактных митохондрий мозга и печени (на 29,8 и 40,3% соответственно). ПБП оказывает также активирующее влияние на Mg²⁺-АТРазу охлажденных митохондрий мозга и печени - 12,9 и 7,6% соответственно. Этот эффект намного больше выражен в митохондриях мозга, чем печени.
   Опыты показали, что ПБП на активность интактных митохондрий Mg²⁺-АТРазы сердца и мышцы почти не действуют, в то время как достоверно повышают активность фермента в охлажденных митохондриях сердца (14,7%). При этом наблюдается некоторая тенденция повышения каталитической активности фермента в охлажденных митохондриях сердца (14,7%). При этом наблюдается некоторая тенденция повышения каталиптической активности фермента в охлажденных митохондриях мышцы (11,1%, p > 0,400).
   Значительный интерес представляло изучение действия ПБП на активность Ca²⁺-АТРазы интактных и охлажденных митохандрий мозга, печени, сердца и мышц.
   Как видно из табл.2, активность фермента несколько подавляетдя под влиянием ПБП в мозгу (5,6%), a также в интактных  митохондриях  сердца  и

                                                                                                                         Таблица 2

мышц, в то время как в печени наблюдается достоверное повышение активности как в интактных митохондриях, так и охлажденных на 24,1 и 26,5% соответственно. В других органах (мозг, сердце, мышцы) активность фермента ощутимо не меняется. Эти данные показывают, что митохондрии мозга наиболее чувствительны к воздействию ПБП как ж норме, так и при стрессе митохондрий (охлаждение).
   Под влиянием ПБП увеличивается активность Ca²⁺-АТРазы только митохондрий печени, как интактных, так и охлажденных. Ca²⁺-АТРаза митохондрий других органов (сердце, мозг, мышцы) на ПБП почти не реагирует. ПБП является активатором Ca²⁺-АТРазы митохондрий печени.
   Таким образом, данные новых исследований свидетельствуют об збирательности влияния ПБП на Mg²⁺- и Ca²⁺-зависимые АТРазы митохондрий мозга, печени, сердца и скелетных мышц.

   Институт биохимии им. Г. Х. Бунятяна НАН РА
 

     1. Galoyan A.A.. Biochemistry of Novel Cardioactive Hormones and Immunomodulators of the Functionl System Heurosecretory Hypothalamus - Endocrine Heart. Nauka publishers. Moscow, 1997. 240 P.
     2. Априкян В.С., Галоян А.А. - ДНАН Армении 1994. Т. 99. № 4. С. 367-371.
     3. Voelter W., Kapurniotu A., Mihelic M. et al. NeurochemRes. 1995. V.20. №1. P. 53-59.
     4. Lowry O.H., Lopez J.A. - Biol.Chem. 1946. V. 162. P. 421.
     5. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L. et al. J. Biol.Chem. 1951.V.193. P. 265-275.
     6. Бессмертный Б.С. Математическая статистика в клинической профилактической и экспериментальной медицине. М., 1967.